人高迁移率族蛋白B1（HMGB-1）ELISA檢測試劑盒實驗原理
本试剂盒应用双抗體夹心法测定标本中人高迁移率族蛋白 B1（HMGB-1）水平。用纯化的人迁移率族蛋白 B1（HMGB-1）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被单抗的微孔中依次加高迁移率族蛋白 B1（HMGB-1），再与 HRP 标记的高迁移率族蛋白 B1（HMGB-1）抗體结合形成抗體-抗原-酶标抗體复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顔色的深淺和樣品中的高遷移率族蛋白B（HMGB-1）呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算品中人高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）濃度。
試劑盒組成
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 標准品（320µg/L） 0.5ml×1 瓶 3 酶标包被板 12孔×8 条 9 標准品稀释液 1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1份
5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2张
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个
標本要求
1．標本采集後盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反複凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 人高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）ELISA檢測劑盒操作步驟
1. 標准品的稀释：本试剂盒提供原倍標准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 160µg/L 5号標准品 150µl的原倍標准品加入150µl標准品稀释液
80µg/L 4号標准品 150µl的5号標准品加入150µl標准品稀释液
40µg/L 3号標准品 150µl的4号標准品加入150µl標准品稀释液
20µg/L 2号標准品 150µl的3号標准品加入150µl標准品稀释液
10µg/L 1号標准品 150µl的2号標准品加入150µl標准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標准品准確加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，然後再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度爲5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重複5次，拍幹。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分 鍾.
10. 终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液後15分鍾以內進行。 計算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即爲樣品的實際濃度。 人高迁移率族蛋白B1（HMGB-1）ELISA檢測試劑盒注意事項
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。 2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其准確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鍾內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于標准品孔*孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數爲准.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
人高迁移率族蛋白B1（HMGB-1）ELISA檢測試劑盒保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月 |
18221290082
021-60517348
